關(guān)于蛋白質(zhì)與雙縮脲試劑,雙縮脲試劑的配制這個(gè)問(wèn)題很多朋友還不知道,今天小六來(lái)為大家解答以上的問(wèn)題,現(xiàn)在讓我們一起來(lái)看看吧!
1、先單獨(dú)加入NaOH溶液是為了營(yíng)造一個(gè)堿性環(huán)境,在堿性環(huán)境下雙縮脲試劑B中的Cu2+與蛋白質(zhì)肽鍵絡(luò)合產(chǎn)生顏色反應(yīng)。
2、如果先將雙縮脲試劑A與雙縮脲試劑B混合,即NaOH與CuSO4溶液混在一起,那么就會(huì)產(chǎn)生Cu(OH)2沉淀,藥劑就會(huì)失去作用,看不到效果,也就無(wú)法判斷是否存在蛋白質(zhì)。
3、雙縮脲試劑B的成分是硫酸銅的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.01 g/mL的水溶液。
4、先將雙縮脲試劑A加入組織樣液,搖蕩均勻(必須營(yíng)造堿性環(huán)境),再加入雙縮脲試劑B,搖蕩均勻。
5、如果組織里含有蛋白質(zhì),那么會(huì)看到溶液變成紫色。
6、具有兩個(gè)或兩個(gè)以上肽鍵的化合物皆可與雙縮脲試劑產(chǎn)生紫色反應(yīng)。
7、蛋白質(zhì)的肽鍵在堿性溶液中能與Cu2+絡(luò)合成紫紅色的化合物。
8、顏色深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比。
9、擴(kuò)展資料:雙縮脲(NH2CONHCONH2)是兩個(gè)分子脲經(jīng)180℃左右加熱,放出一個(gè)分子氨后得到的產(chǎn)物。
10、在強(qiáng)堿性溶液中,雙縮脲與二價(jià)銅離子形成紫色絡(luò)合物,稱(chēng)為雙縮脲反應(yīng)。
11、凡具有兩個(gè)酰胺基或兩個(gè)直接連接的肽鍵,或能夠以一個(gè)中間碳原子相連的肽鍵,這類(lèi)化合物都有雙縮脲反應(yīng)。
12、紫色絡(luò)合物顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比,而與蛋白質(zhì)分子量及氨基酸成分無(wú)關(guān),故可用來(lái)測(cè)定蛋白質(zhì)含量。
13、干擾這一測(cè)定的物質(zhì)主要有:硫酸銨、Tris緩沖液和某些氨基酸等。
14、此法的優(yōu)點(diǎn)是較快速 ,不同的蛋白質(zhì)產(chǎn)生顏色的深淺相近,以及干擾物質(zhì)少。
15、主要的缺點(diǎn)是靈敏度差,不適合微量蛋白的測(cè)定。
16、參考資料來(lái)源:百度百科-雙縮脲法。
本文分享完畢,希望對(duì)大家有所幫助。
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